サンガー法

サンガー法は、1977年にフレデリック・サンガーによって開発された革命的なDNAシークエンシングの技術です。この方法は、特定のDNA領域の塩基配列を決定するために広く使用されており、生物学研究において重要な役割を果たしています。

開始段階

  1. プライマー: サンガー法は、特定のDNA領域のシークエンシングを開始するために短いDNA断片、つまりプライマーを使用します。このプライマーは、シークエンシングしたいDNAの特定の位置に相補的に結合します。

DNA合成

  1. DNAポリメラーゼ: DNA複製に関与する酵素であるDNAポリメラーゼを使用して、プライマーからDNAの新しい鎖を合成します。
  2. デオキシヌクレオチド: 通常のDNA合成に必要な4つのデオキシヌクレオチド(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)が反応に加えられます。

鎖終結子の導入

  1. ジデオキシヌクレオチド: サンガー法の特徴的な要素は、少量の変更されたヌクレオチド、ジデオキシヌクレオチド(ddNTP)を含むことです。これらは通常のヌクレオチドと似ていますが、DNA鎖の延長を阻止します。
  2. ランダムな終結: これらのddNTPはランダムにDNA鎖に取り込まれ、DNA合成がその点で終了します。これにより、さまざまな長さのDNA断片が生成されます。

電気泳動による分析

  1. 断片の分離: 生成されたDNA断片は電気泳動によってサイズ別に分離されます。
  2. 読み取り: ゲル上での断片の位置を読み取ることにより、DNAの塩基配列が決定されます。各断片の末端には異なる塩基があり、最短の断片から最長の断片までの順番に従って塩基配列が確定されます。

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