プロテオーム受託解析

サービス概要

〇プロテオーム受託解析の流れ STEP1：受託解析のお申し込み サンプルの抽出条件から、ご相談させて頂きます。 有償にて、サンプル抽出作業を行う事も可能です。 当社でサンプル抽出を行う場合の組成は、7M Urea、2M Thiourea、32.5mM CAHPS、0.1M DTT、2.5％ Pharmalyte pH3－10 です。 タンパク濃度が低いサンプル、もしくは、脱塩処理が必要なサンプルに関しては、アセトン沈殿処理も行います。 論文などで報告されているサンプル抽出条件に合わせたい場合は、ご相談下さい。 STEP2：二次元電気泳動解析 二次元電気泳動実験は、一次元目の固定化pH勾配ゲルストリップのpH範囲条件（pH4~7 と pH3~10NL）と、二次元目のSDSポリアクリルアミドゲルの濃度条件（10.0％ と 12.5％）から選択して頂きます。初めて二次元電気泳動実験を行うサンプルに関しては、一次元目のpH範囲条件はpH4~7、二次元目の濃度条件は12.5％がお薦めです。 二次元電気泳動実験を行ったSDSポリアクリルアミドゲルは、SYPRO Ruby（蛍光染色液）にて染色を行いまして画像撮影を行います。 蛍光染色法は、微量なタンパク質スポットも検出可能で、質量分析解析でも良好な結果が得られます。 STEP3：質量分析解析 SDSポリアクリルアミドゲルから、目的スポットの回収作業を行いまして、ハイブリッドフーリエ変換LC-MS/MS Q Exactive(Thermo Scientific社)などの優れた質量精度を誇る質量分析装置にて行います。 使用機器が高感度なことにより、他社で結果が出なかったサンプルでも結果を出しております。 質量分析解析の結果は、Scaffoldソフトウェアを使用して、詳細情報が確認できます。

サンプル種類

組織、培養細胞、血清、植物など、タンパク質が含まれる全てのサンプル有償にてサンプル抽出作業を行う事も可能です。※ タンパク濃度が低いサンプル、もしくは、脱塩処理が必要なサンプルに関しては、アセトン沈殿処理も行います。

解析法（図）

解析法

〇二次元電気泳動受託解析サービス ■実験仕様 一次元目 … 18cm 固定化pH勾配ゲルストリップ (Immobiline DryStrip (GE Healthcare)など) にて、pH4－7 もしくは pH3－10NL より選択 二次元目 … 10.0％、もしくは、12.5％ SDSポリアクリルアミドゲルより選択 染色方法 … SYPRO Ruby(蛍光染色) 撮影 … フルオロホレスター3000 (600万画素冷却CCDカメラ） ■画像解析 二次元電気泳動画像解析ソフトウェア・SameSpots(Totallab社)にて解析。 〇質量分析 LC-MS/MSサービス ■解析内容 ハイブリッドフーリエ変換LC-MS/MS Q Exactive(Thermo Scientific社)などの質量分析装置にて解析を行います。 解析作業は米国にて行います。

報告内容

〇二次元電気泳動受託解析サービス 変動しているスポットの中から2倍以上の差異のあるスポット情報を報告します。 また、全てのスポットの画像解析結果のデジタルデータ(CD-ROMなど)を報告します。 〇質量分析 LC-MS/MSサービス Scaffoldファイルとデータファイル(Excel)を報告します。Scaffoldファイルは、Scaffoldソフトウェアを使用して詳細情報が確認できます。

納期

〇二次元電気泳動受託解析サービス 約3週間 〇質量分析 LC-MS/MSサービス 約3週間

備考

〇二次元電気泳動受託解析サービス ■その他 有償にて、ProQ Diamond染色による、リン酸化タンパク質の変動解析を行う事も可能です。 ■補足事項 ご使用中の質量分析装置で解析を行う場合は、報告書と合わせて実験で取得したポリアクリルアミドゲルを返却します。 また、有償にてポリアクリルアミドゲルから目的スポットの回収作業を行う事も可能です。 ■注意 感染性のあるサンプルは取り扱いできません。 感染性が疑われる場合には不活性処理を行ったサンプルを送付ください。 〇質量分析 LC-MS/MSサービス ■補足事項 SDSポリアクリルアミドゲルから、スポットを回収する場合は、別途にて費用が掛かります。