重力が細胞に与えるストレスを最小限に抑えることで、生体内に近い環境での3次元的な細胞培養を可能にします。 107cells/mlを超える培養環境を作り出すことが可能です。泡を立てないガス交換方式のため、培地が乱流環境になりません。通常のインキュベーターでの使用が可能で、既存の方法で細胞培養が行えます。 シンセコン社はRotary Cell Culture System (RCCS) のデザインと製造において業界をリードしています。RCCSは3次元的な構築が困難である細胞培養の普及のためにデザインされたユニークな形状のバイオリアクタ―で、多くの利点を備えた細胞培養のための技術です。 〇RCCSで培養した細胞はユニークな特性を示します ・遺伝子の発現量が上昇します ・3D構造の自発的な形勢が見られます ・バイオプロダクトの生産性が向上します ・共培養が容易になります 細胞と共にキャリアービーズ等をベセルに充填して足場として利用することで、他のシステムでは培養不可能なもろい細胞の培養を可能にします。標準的な細胞培養培地での使用が可能なため高い汎用性をもち、すでに50以上の細胞種での実例が報告されています。
〇RCCSの原理 RCCSは細胞培養チェンバーを回転させることで重力の影響を減少させた特殊な環境を作り出し、培地中の細胞を浮遊させた状態で培養できます。培地及び細胞をベセルに充填し、装置ごとCO2インキュベーター内に設置し培養を行います。RCCSは細胞や組織の成長を促進するのに非常に優れた細胞培養環境を提供します。 〇安定したガス交換 HARV培養ベセルには平面上のガス交換膜がSTLV培養ベセルは中心に管状のガス交換膜がそれぞれ組み込まれています。この交換膜により、効率的な酸素供給と気泡を生じさせない環境を両立させました。また、効率的に老廃物の除去を行うことも可能で、その安定した環境がマイクロキャリアー培養および組織培養に使用できます。
RCCSの原理
安定したガス交換
〇幹細胞用再利用培養べセル:HARV1、2、4 HARV1、2、4は幹細胞培養用に新たに開発された平面状メンブレンタイプのベセルで1ml、2ml、4mlのタイプがあり、RCCS-1SC、RCCS-4SC、RCCS-4SCQと組み合わせて使用します。分解してオートクレープ滅菌をすることで繰り返して使用することが可能です。 〇再利用培養ベセル:HARV-10、50 STLV-55、110、250、500 HARV-10、50は平面状メンブレンタイプで浮遊細胞と付着細胞の培養に適しています。サイズは50mlと10mlがあります。 STLV-55、110、250、500は管状メンブレンタイプで55ml、110ml、250ml、500mlのタイプがあり組織培養に適しています。 HARV、STLVとも分解してオートクレーブ滅菌をすることで繰り返して使用することが可能です。 〇ディスポ培養ベセル 扱いが容易な使い捨ての培養ベセルです。ベセルはγ線滅菌され1つずつパックされていますので、安心してご使用いただけます。基本的にはRCCS-1D,4D,4DQ対応ですが、RCCS-1,RCCS-4でも使用可能です。形状は平面状のHARVのみでサイズは10ml、50mlの2種類、それぞれ4つ組での販売となります。ディスポ培養ベセルにも平面状のガス交換膜が組み込まれております。 〇シンセコン社RCCSラインナップ シンセイコン社RCCSは10mlから500mlまでのシンセコン社製培養ベセルを使用できるユニークな細胞培養装置です。RCCS-1、RCCS-4はHARV10、50およびSTLV用の装置でガスを送り込むためのポンプが搭載されており、再利用、ディスポの両ベセルに対応しています。RCCS-1SC、RCCS-4SCは幹細胞用再利用培養ベセルHARV1、2、4用の装置です。RCCS-4SCQでは4つの培養ベセルの回転を独立制御することが可能です。システムには回転制御装置が含まれます。細胞の状態に合わせた回転数制御が可能で、多様な培養条件に対応します。また、RCCS-1D、RCCS-4Dはディスポベセル用の装置で、ポンプが搭載されていません。他に4つのディスポ培養ベセルの回転を独立制御することが可能なRCCS-4DQというシステムもご用意しております。
〇よくあるご質問 Q Synthecon 駆動部本体のサイズを教えてください。 A 幅 高さ 奥行き(突起含む) の順で RCCS-1 170mm 150mm 300mm RCCS-1D 140mm 105mm 205mm RCCS-4 300mm 300mm 300mm RCCS-4D & 4DQ 240mm 205mm 205mm となります。 2006年2月1日記載 Q Synthecon 再利用タイプSTLVベセルの外寸を教えてください。 A ・55mlベセル 直径約7センチ、奥行き約2センチ ・110mlベセル 直径約7センチ、奥行き約4.6センチ ・250mlベセル 直径約7センチ、奥行き約11センチ ・500mlベセル 直径約9.5センチ、奥行き約9.5センチ 上記奥行きは突起部(本体取り付け部)を含みませんので、実際のサイズはプラス5センチ程見てください。 2006年2月1日記載 Q Synthecon 3次元培養システムのべセルのメンブレンの素材は何ですか? A シリコンメンブレンです。 Q Syntheconの培養ベセルの内部に、細胞付着防止の親水性コーティングをしても大丈夫ですか? A コーティングせずに御利用することを推奨致します。培養に影響が出る可能性があります。 Q Synthecon 目に見えないサイズの培養について(速度、培地交換) A 1. 回転速度は実験サンプルにより最適条件を見つける必要がある為、明確な基準はありません。 まず、目に見えないサイズの細胞培養は目に見えるサイズと同じと捉えて条件検討をします。 ・細胞の集合が始まった場合、ベセル内壁に細胞が付着しない様に随時速度を増加させます。 ・集合を形成しない場合は回転速度5-10rpmで観察して下さい。 2. 培地交換はクリ-ンベンチ内で行います。 ベセルから全培養液を抽出し1.5mlチューブなどに移します。 遠心分離の後上澄み液を廃棄します。 新しい培地をチューブに浸し、全量をベセルへ戻し培養を再開します。 2008年1月7日記載 Q Synthecon 再利用ベセルの材質はなんですか? A 白い部分:デルリン(Delrin) 透明な部分:ポリカーボネート となっております。 2008年1月7日記載 Q Synthecon RCCS-1 ベセル回転数を具体的に知りたい A 回転機器本体の背面切り替えスイッチにより、下記2種類調整出来ます。 低速スイッチの場合:7.5~30rpm 高速スイッチの場合:15~60rpm 2008年5月8日記載 Q Synthecon 再利用ベセルのメンブレン使用期限について A 約2年程が目安です。 2010年3月31日記載
〇RCCSを用いた細胞培養例 ・再生工学 骨髄細胞や軟骨細胞の再生、肝臓などの臓器の再生 ・基礎医学 薬剤反応試験、動物を用いた臨床試験モデル ・基礎研究 がん細胞やウイルスの培養、幹細胞の培養 ※その他、シンセコン社製RCCSによる細胞及び組織培養の成功例は多数あります。詳しくはお問い合わせ下さい。
<シンセコン社RCCSを用いている主な論文例> 〇Tissue Engineering Manley P,Lelkes Pl.A novel real-time system to monitor cell aggregation and trajectories in rotating wall vessel bioreactors. J Biotechnol 125:416-424,2006 Kumar R,Dutt K:Enhanced neurotrophin synthesis and molecular differentiation in non-transformed human retinal progenitor cells cultured in a rotating bioreactor. Tissue Eng.12:141-158,2006. 〇STEM CELLS Yoshioka T,Mishima H,Ouyabu Y,Sakai S,Akaogi H,Ishii T,Kojima H,Tanaka J,Ochiai N,Uemura T.Repair of large osteochondral defects with allogenic cartilaginous aggregtes formed from bone marrow-derived cells using RWV bioreactor. J Orthop Res 25:1291-1298,2007 Pound JC,Green DW,Dhaudhuri JB,Mann S,Roach HI,Oreffo RO,Strategies to Promote Chondrogenesis and Osteogenesis from Human Bone Marrow Cells and Articular Chrondrocytes Encapsulated in Polysaccharide Templates. Tissue Eng 12:2789-2799,2006 〇BONE Chen SS,Fitzgerald W,Zimmerberg J,Kleinman HK,Margolis L,Cell-cell and cell-extracellular matrix interactions regulate embryoniv stem cell differentiation. Stem Cells 25:553-561,2007 Chen X,Xu H,Man C,McCaigue M,Li G. Bioreactor Expansion of Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells 24:2052-2059,2006 〇HEART/CARDIO-VASCULAR Bruno S,Bussolati B,Scacciatella P,Marra S,Sanavio F,Tarella C,Camussi G,Combined administration of G-CSF and GM-CSF stimulates monocyte-derived pro-angiogenic cells in patients with acute myocardeal infarction. Cytokine 34:56-65,2006 Bursac N,Papadaki M,White JA,Eisenberg SR,Vunjak-Novakovic G,Freed L:Cultivation in Rotating Bioreactors Promotes Maintenance of Cardiac Electrophysiology and Molecular properties. Tissue Eng.Vol.9:1243-1253,2003.