gRNA設計等について

gRNA、ドナーDNA等の設計委託は可能か?
設計は基本料に含まれております。当方で設計し、ご確認後に製造開始の流れになります。
実験で使用するドナーベクターの構造は事前に連絡してくれますか。
弊社の技術では、受精卵にCas9タンパク質とgRNAを直接導入するため、ベクターは使用しません。ターゲット遺伝子名を教えて頂き、gRNAの設計をご提案し、ご承認を頂いてから実験に着手します。
弊社に依頼した場合には、研究室・研究機関で独自に使っているsgRNAは使用できませんか。
使用できます。配列情報を頂ければ、こちらで合成して実験に用います。
研究室・研究機関で独自に使っているcrRNA、sgRNAを使用したいときは、どのように輸送すればよいでしょうか。
凍結乾燥品での輸送をお願いします。凍結乾燥品での輸送が難しいようでしたら、次の条件でお願いします。
①Opti-MEMIで、
②濃度 2 ug/uLになるように溶かしてください。
③sgRNAかcrRNAかどちらかわかるように記入をお願いします。
④冷凍で輸送をお願いします。
⑤crRNAは、5-6uL程度あれば十分ですが、量も少ないので、念の為10uL冷凍送付いただければ安心です。
ノックアウトゲノム編集による遺伝子欠損において、その欠損が生体に与える影響を懸念しております。
ゲノム編集の方法としまして点変異等で終止コドンを挿入するという形で、最終産物の変異を固定し、最小限の置換に留めるという方法もございます。

参考文献

  1. Hashimoto, M. and Takemoto, T*. Electroporation enables the efficient mRNA delivery into the mouse zygotes and facilitates CRISPR/Cas9-based genome editing. Sci. Rep. 5, 11315; doi: 10.1038/srep11315 (2015).
  2. Hashimoto M, Yamashita Y, Takemoto T*.Electroporation of Cas9 protein/sgRNA into early pronuclear zygotes generates non-mosaic mutants in the mouse. Dev. Biol. 418: 1-9 (2016).
  3. Tanihara F, Takemoto T*, Kitagawa E, Rao S, Do L, Onishi A, Yamashita Y, Kosugi C, Suzuki H, Sembon S, Suzuki S, Nakai M, Hashimoto M, Yasue A, Matsuhisa M, Noji N, Fujimura T, Fuchimoto Di, Otoi T*. Somatic cell reprogramming-free generation of genetically modified pigs. Science Advances. 2 (9) e1600803 (2016).
  4. Sawatsubashi S*, Joko Y, Fukumoto S, Matsumoto T, Sugano SS*. Development of versatile non-homologous end joining-based knock-in module for genome editing. Sci Rep. 2018 Jan 12;8(1):593.