基因编辑培养细胞

open

节郎科技提供通过VIKING法生产的基因编辑培养细胞,这是一种分析基因和蛋白质功能的工具。我们的基因编辑培养细胞范围包含Hela,HepG2,HEK293F等。此外,节郎科技提供套装服务,包括生产基因编辑的细胞,或者另外有提供基因和蛋白质分析的服务。如果您想节省宝贵的时间的话,请与我们联系!

基因敲除细胞

Knockout cell

将包括耐药标志物在内的供体载体插入到目的部位,破坏靶基因。
将包括耐药标志物在内的供体载体插入到靶序列的单边等位基因中,通过indel(插入与缺失)进行移码,敲除单边等位基因。

基因敲入细胞

Knock-in cell

主要将载体敲入安全港位点(AAVS1)。
通过将基因敲入安全港位点,能够稳定地发现目的蛋白质。

基因替换

Gene replacement

通过2个步骤制作培养细胞的点突变细胞。
①敲除内源性基因
②将点突变序列敲入安全港位点
*由于敲入安全港位点,点突变基因将不再发现内源性。
Tips 也有“人源化(humanization)”等的利用方法。

VIKING法

VIKING(Versatile NHEJ-based Knock-in using genome editing)法是指,对利用NHEJ(非同源末端连接)的基因敲入技术进行改良,通过优化载体的导入率,成功地急剧降低了意料之外的突变(脱靶效应)。
靶标基因切割载体、供体载体、供体切割载体这3个载体复合地起作用,能够几乎整个地插入到载体序列中,而不损伤基因。
利用耐药标志物易于筛选细胞,还能够插入超过10kbp的大型载体。另一方面,不擅长数个碱基的缺失,并有可能将包括耐药标志物在内的载体序列插入到基因序列中。

References

  1. Hashimoto, M. and Takemoto, T*. Electroporation enables the efficient mRNA delivery into the mouse zygotes and facilitates CRISPR/Cas9-based genome editing. Sci. Rep. 5, 11315; doi: 10.1038/srep11315 (2015).
  2. Hashimoto M, Yamashita Y, Takemoto T*.Electroporation of Cas9 protein/sgRNA into early pronuclear zygotes generates non-mosaic mutants in the mouse. Dev. Biol. 418: 1-9 (2016).
  3. Tanihara F, Takemoto T*, Kitagawa E, Rao S, Do L, Onishi A, Yamashita Y, Kosugi C, Suzuki H, Sembon S, Suzuki S, Nakai M, Hashimoto M, Yasue A, Matsuhisa M, Noji N, Fujimura T, Fuchimoto Di, Otoi T*. Somatic cell reprogramming-free generation of genetically modified pigs. Science Advances. 2 (9) e1600803 (2016).
  4. Sawatsubashi S*, Joko Y, Fukumoto S, Matsumoto T, Sugano SS*. Development of versatile non-homologous end joining-based knock-in module for genome editing. Sci Rep. 2018 Jan 12;8(1):593.
咨询
ページの先頭へ